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    大鼠Elisa試劑盒試驗詳細記錄是重點

    更新時間:2015-03-02   點擊次數(shù):1514次
       本大鼠Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠S100蛋白(S-100)水平。用純化的大鼠S100蛋白(S-100)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入S100蛋白(S-100),再與HRP標記的S100蛋白(S-100)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,大鼠Elisa試劑盒經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100蛋白(S-100)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠S100蛋白(S-100)濃度。
      大鼠Elisa試劑盒操作程序
      1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。
      2.將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。大鼠Elisa試劑盒處理后的標本按100ul每孔加入。
      3.酶標板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。
      4.大鼠Elisa試劑盒反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體;或甩去酶標板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
      5.將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
      6.0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,大鼠Elisa試劑盒每次浸泡1分鐘左右。
      7.將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
      8.0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,大鼠Elisa試劑盒每次浸泡1-2分鐘左右。
      9.每孔0.1ml依次加入TMB工作液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘)。
      10.大鼠Elisa試劑盒用酶標儀在450nm測定O.D.值。
      11.根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應(yīng)該×N。
      大鼠Elisa試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知OTR濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將OTR和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中OTR的濃度呈比例關(guān)系。
      大鼠Elisa試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,能測量鴨TNFα,只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。用戶須查閱文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于大鼠Elisa試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄。
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